稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）

Z6·尊龙凯时为评估抗菌剂抑制微生物生长能力提供了一种实验技术，包含微量稀释法和肉汤稀释法。琼脂稀释法因其操作简单、成本低且适合高通量筛选而受到广泛应用，特别是在自动化操作和药物浓度控制方面具有明显优势。肉汤稀释法则以其直观易用，适合实验室规模测试的特点，能够根据实验需求灵活调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

1. 原理

本实验利用琼脂稀释法，将不同浓度的抑菌剂溶解在琼脂培养基中，点种细菌，根据细菌的生长状况来确定抗菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法特别适用于不溶性抗菌产品。

2. 操作步骤

1. 抗菌溶液配制：采用无菌操作取5ml或5g样品，放入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡溶解，制成10%的均匀溶液或悬液。
2. 含抗菌剂培养基配制：将10%的抗菌溶液用PBS进行系列稀释，制成不同浓度的受试液，置于45℃～50℃水浴中恒温备用。
3. 双倍浓度培养基配制：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中，加热至沸腾后121℃灭菌15分钟，置于45℃～50℃水浴备用。
4. 含抗菌液的培养基配制：将10ml系列稀释的抗菌液加入平皿，适量加入双倍MH琼脂培养基，摇匀后待凝固备用。
5. 菌种接种：使用加样器取1μl～2μl的细菌悬液点种于含抗菌液的平皿中，接种后形成的菌液圈直径约5mm～8mm。
6. 阳性对照：同样方法接种不含抗菌成分的MH琼脂平板。
7. 培养观察：将接种后的平板置于35℃培养箱中倒置培养18h～24h，观察结果。

3. 结果评判

规定菌落生长被完全抑制的最低抗菌液浓度即为该样品对受试菌的MIC。单一菌落生长可视为忽略不计。

营养肉汤稀释法

1. 原理

本实验将不同浓度的抑菌剂溶解于营养肉汤培养基中，接种细菌，通过细菌的生长情况来确定抗菌剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法适用于可溶性抑菌产品。

2. 操作步骤

1. 根据标准方法制备的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌悬液。
2. 含抗菌剂培养基配制：用蒸馏水对抗菌溶液进行系列稀释，取各稀释度受试液25ml，加入含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
3. 菌液接种：取0.1ml的细菌悬液（约108cfu/ml）接种于含抗菌剂的营养肉汤试管中，作为实验组样本。
4. 阳性对照组：同样方法接种不含抗菌剂的试管中。
5. 阴性对照组：取两支含营养肉汤的试管，作为阴性对照组样本。
6. 培养观察：将实验组、阳性对照组和阴性对照组放置于37℃培养箱中培养48h，记录结果。
7. 活菌计数：在实验过程中，对试验用菌悬液进行活菌计数，浓度应为5×10⁵cfu/ml～5×10⁶cfu/ml。

3. 结果评判

当阳性对照管出现细菌生长（混浊），阴性对照管无菌生长（透明），试验用菌悬液浓度在5×10⁵cfu/ml～5×10⁶cfu/ml时，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。Z6·尊龙凯时将这一方法应用于医疗领域，为抗菌剂的有效性评估提供了科学依据。