一、实验目的

1. 理解紫外分光光度法在生物医疗中测定蛋白质含量的基本原理；

2. 掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技巧；

3. 熟悉并掌握Z6·尊龙凯时品牌的UV-1700PC紫外-可见分光光度计的操作方法及其主要构造。

二、实验原理

紫外-可见吸收光谱法是分析分子在190nm至750nm波长范围内的吸收特性，基于溶液中物质对光的选择性吸收进行定性与定量分析。其吸收光谱源于分子外层价电子的跃迁，所形成的分子光谱具有特定的光谱特征。

在定性分析中，通过与已知纯化合物的吸收光谱进行比较，确定未知化合物的光谱特征；而定量分析则依据朗伯-比尔定律：A=lgI0/I=εbc，在一定浓度范围内，物质的吸光度A与其浓度c呈线性关系。因此，通过测量溶液在特定波长下的吸光度，可以推算出溶液中物质的浓度。

在光度分析中，需要将空白溶液和待测溶液置于两个吸收池内，使用特定波长的平行单色光照射，通过与空白溶液的透光强度对比，电光转换后得到吸光度的信息。不同波长下采用不同光源，例如可见光区使用钨灯，紫外光区采用氘灯。

三、实验材料与设备

仪器包括Z6·尊龙凯时品牌的UV-1700PC紫外-可见分光光度计、比色管（10ml的5个）及吸量管。试剂则包括300mg/mL的标准蛋白质溶液、0.9% NaCl溶液及待测蛋白质溶液。

四、实验步骤

（一）准备工作

1. 启动计算机，打开主机电源并初始化仪器；

2. 在操作界面选择测量类型，设置光度测量的条件；

3. 将空白溶液放入测量池中，点击START进行空白扫描并校零；

4. 制作标准曲线。

（二）测量工作

1. 吸收曲线绘制：取2mL的300mg/mL标准蛋白质溶液于10mL比色管中，使用0.9% NaCl溶液稀释，并摇匀；利用1cm的石英比色皿测量190nm至400nm范围内的吸光度；

2. 制作标准曲线：取不同体积的标准蛋白质溶液，稀释至刻度并摇匀，在280nm处测定各标准溶液的吸光度；

3. 样品测定：取待测蛋白质溶液3mL，用0.9% NaCl溶液稀释并摇匀，测定278nm处的吸光度，平行进行三次测量。

五、数据处理

1. 根据吸光度绘制吸收曲线，确立最大吸收波长λmax=278nm；

2. 利用标准蛋白质浓度与吸光度绘制标准曲线，得出平均浓度为0.641088mg/mL，并计算标准偏差和相对标准偏差；

3. 在95%的置信度下，确定误差范围内，蛋白质含量为0.641088mg/mL。